| 品牌Solarbio | 有效期至长期有效 |
最后更新2022-04-20 21:47 |
| 浏览次数43 |
潮霉素B（干粉） Hygromycin B 31282-04-9
| 有效期 | 4年 |
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| 溶解性 | 100mg/ml in Water |
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| 来源 | 放线菌发酵产品 |
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| 别名 | 湿霉素乙 效高素 潮霉素B干粉 |
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| 英文名称 | Hygromycin B |
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| CAS | 31282-04-9 |
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| 储存条件 | -20℃ |
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| 纯度 | >90% |
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| 酶活/效价 | 效价≥950U/mg |
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| 外观(性状) | 白色粉末
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| 单位 | 瓶 |
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效价:≥950U/mg
本品是潮霉素B干粉,用于细胞培养实验溶解后过滤除菌。推荐溶剂水,PBS溶液。
说明:蛋白质合成抑制剂,可用于植物细胞培养等生化研究。潮霉素B(Hygromycin B)是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),编码潮霉素B磷酸转移酶,将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到解毒作用。针对这一原理,潮霉素B是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外,由于作用模式的差异,常与G418 (Cat:G8161),Zeocin(Cat:Z8020)和Blasticidin S(Cat:B9300)联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂,因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞,且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。使用方法1. 常用筛选浓度注意:潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定*筛选浓度。一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。2. 杀灭曲线的建立注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素*浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。终浓度(μg/mL)
| 培养基体积(ml)
| 5mg/ml潮霉素B加入体积(ml)
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50 | 9.9 | 0.1 |
100 | 9.8 | 0.2 |
250 | 9.5 | 0.5 |
500 | 9.0 | 1.0 |
750 | 8.5 | 1.5 |
1000 | 8.0 | 2.0 |
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的*浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。3. 稳定转染细胞的筛选1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果*。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,*将细胞稀释至丰度不超过25%。2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。5) 之后更换正常培养基培养即可。注意事项1) 潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自E. Coli.之外,还发现于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。2) 本品为有毒化合物,避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作。3) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 备注:产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。
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